Fosforilasi ngaktipkeun pangatur pertumbuhan utama DELLA dina Arabidopsis ku cara ningkatkeun asosiasi histon H2A sareng kromatin.

Protéin DELLA dilestarikan salaku indukpangatur pertumbuhananu maénkeun peran sentral dina ngontrol kamekaran pepelakan salaku réspon kana isyarat internal sareng lingkungan. DELLA bertindak salaku régulator transkripsi sareng direkrut pikeun narékahan promotor ku cara ngabeungkeut faktor transkripsi (TF) sareng histon H2A ngalangkungan domain GRAS na. Panilitian anyar nunjukkeun yén stabilitas DELLA diatur sacara pasca-translasi ngalangkungan dua mékanisme: poliubiquitinasi anu diinduksi ku fitohormon giberelin, anu ngarah kana degradasi gancangna, sareng konjugasi modifier sapertos ubiquitin leutik (SUMO) pikeun ningkatkeun akumulasi na. Salaku tambahan, aktivitas DELLA diatur sacara dinamis ku dua glikosilasi anu béda: interaksi DELLA-TF ditingkatkeun ku O-fucosylation tapi dihambat ku modifikasi N-acetylglucosamine (O-GlcNAc) anu numbu ka O. Nanging, peran fosforilasi DELLA tetep teu jelas, sabab panilitian sateuacana nunjukkeun hasil anu bertentangan, mimitian ti anu nunjukkeun yén fosforilasi ngamajukeun atanapi ngirangan degradasi DELLA ka anu sanés anu nunjukkeun yén fosforilasi henteu mangaruhan stabilitasna. Di dieu, urang ngaidentipikasi situs fosforilasi dina REPRESSORga1-3(RGA, AtDELLA) dimurnikeun tina Arabidopsis thaliana ku analisis spéktrométri massa sareng nunjukkeun yén fosforilasi dua péptida RGA di daérah PolyS sareng PolyS/T ningkatkeun pangiket H2A sareng ningkatkeun aktivitas RGA. Asosiasi RGA sareng promotor target. Anu penting, fosforilasi henteu mangaruhan interaksi RGA-TF atanapi stabilitas RGA. Panilitian kami ngungkabkeun mékanisme molekuler dimana fosforilasi ngainduksi aktivitas DELLA.
Pikeun ngajelaskeun peran fosforilasi dina ngatur fungsi DELLA, penting pisan pikeun ngaidentipikasi situs fosforilasi DELLA in vivo sareng ngalaksanakeun analisis fungsional dina pepelakan. Ku cara purifikasi afinitas ekstrak pepelakan dituturkeun ku analisis MS/MS, kami ngaidentipikasi sababaraha situs fosforilasi dina RGA. Dina kaayaan kakurangan GA, fosforilasi RHA ningkat, tapi fosforilasi henteu mangaruhan stabilitasna. Anu penting, uji co-IP sareng ChIP-qPCR ngungkabkeun yén fosforilasi di daérah PolyS/T RGA ningkatkeun interaksi sareng H2A sareng hubunganana sareng promotor target, ngungkabkeun mékanisme fosforilasi ngainduksi fungsi RGA.
RGA direkrut pikeun ngatargetkeun kromatin ngaliwatan interaksi subdomain LHR1 sareng TF teras ngabeungkeut kana H2A ngaliwatan daérah PolyS/T sareng subdomain PFYRE na, ngabentuk kompleks H2A-RGA-TF pikeun ngastabilkeun RGA. Fosforilasi Pep 2 dina daérah PolyS/T antara domain DELLA sareng domain GRAS ku kinase anu teu dikenal ningkatkeun pangiket RGA-H2A. Protéin mutan rgam2A ngaleungitkeun fosforilasi RGA sareng ngadopsi konformasi protéin anu béda pikeun ngaganggu pangiket H2A. Ieu ngahasilkeun destabilisasi interaksi TF-rgam2A samentawis sareng disosiasi rgam2A tina kromatin target. Gambar ieu ngan ukur ngagambarkeun represi transkripsi anu dimediasi RGA. Pola anu sami tiasa dijelaskeun pikeun aktivasi transkripsi anu dimediasi RGA, kecuali kompleks H2A-RGA-TF bakal ngamajukeun transkripsi gén target sareng defosforilasi rgam2A bakal ngirangan transkripsi. Gambar dirobih tina Huang et al.21.
Sadaya data kuantitatif dianalisis sacara statistik nganggo Excel, sareng béda anu signifikan ditangtukeun nganggo uji t Student. Teu aya metode statistik anu dianggo pikeun nangtukeun ukuran sampel sacara awal. Teu aya data anu dikaluarkeun tina analisis; ékspérimén henteu diacak; para panaliti henteu lolong kana distribusi data salami ékspérimén sareng évaluasi hasilna. Ukuran sampel dituduhkeun dina legenda gambar sareng file data sumber.
Kanggo inpormasi lengkep ngeunaan desain panilitian, tingali Abstrak Laporan Portofolio Alami anu aya hubunganana sareng tulisan ieu.
Data protéomik spéktrométri massa parantos disumbangkeun ka konsorsium ProteomeXchange ngalangkungan repositori mitra PRIDE66 kalayan idéntifikasi dataset PXD046004. Sadaya data sanés anu diala salami panilitian ieu dipidangkeun dina Inpormasi Tambahan, File Data Tambahan, sareng File Data Atah. Data sumber disayogikeun pikeun tulisan ieu.