Ulikan ieu ditaksir lethality, sublethality, jeung karacunan komérsialsipermetrinformulasi kana anuran berudu. Dina tés akut, konsentrasi 100-800 μg / L diuji salami 96 jam. Dina tés kronis, konséntrasi cypermethrin alami (1, 3, 6, sareng 20 μg / L) diuji pikeun mortalitas, dituturkeun ku uji micronucleus sareng abnormalitas nuklir sél getih beureum salami 7 dinten. LC50 tina formulasi cypermethrin komérsial pikeun tadpoles nyaéta 273,41 μg L−1. Dina tés kronis, konsentrasi pangluhurna (20 μg L−1) nyababkeun maotna leuwih ti 50%, sabab maéhan satengah tina tadpoles anu diuji. Uji micronucleus nunjukkeun hasil anu signifikan dina 6 sareng 20 μg L−1 sareng sababaraha abnormalitas nuklir dideteksi, nunjukkeun yén formulasi cypermethrin komérsial ngagaduhan poténsi genotoksik ngalawan P. gracilis. Cypermethrin mangrupikeun résiko luhur pikeun spésiés ieu, nunjukkeun yén éta tiasa nyababkeun sababaraha masalah sareng mangaruhan dinamika ékosistem ieu dina jangka pondok sareng panjang. Ku alatan éta, bisa dicindekkeun yén formulasi cypermethrin komérsial boga épék toksik on P. gracilis.
Alatan perluasan kontinyu kagiatan tatanén sarta aplikasi intensif tinakontrol hamaukuranana, sato akuatik remen kakeunaan péstisida1,2. Polusi sumber daya cai deukeut widang tatanén bisa mangaruhan ngembangkeun sarta survival organisme non-target kayaning amfibi.
Amfibi janten langkung penting dina penilaian matriks lingkungan. Anuran dianggap bioindikator anu hadé pikeun polutan lingkungan kusabab ciri unikna sapertos siklus kahirupan anu kompleks, laju pertumbuhan larva gancang, status trofik, kulit permeabel10,11, gumantungna kana cai pikeun baranahan12 sareng endog anu teu dijagi11,13,14. Kodok cai leutik (Physalaemus gracilis), anu biasa katelah bangkong nangis, geus kabuktian jadi spésiés bioindikator polusi péstisida4,5,6,7,15. Spésiés ieu kapanggih dina cai nangtung, wewengkon ditangtayungan atawa wewengkon kalawan habitat variabel di Argentina, Uruguay, Paraguay jeung Brazil1617 sarta dianggap stabil ku klasifikasi IUCN alatan distribusi lega sarta toleransi habitat béda18.
épék sublethal geus dilaporkeun dina amphibian handap paparan cypermethrin, kaasup kabiasaan, morfologis jeung biokimiawi parobahan dina tadpoles23,24,25, mortality dirobah sarta waktu métamorfosis, parobahan énzimatik, panurunan sukses hatching24,25, hyperactivity26, inhibisi aktivitas cholinesterase 27,28 ngojay. Tapi, studi ngeunaan épék génotoksik cypermethrin dina amfibi diwatesan. Ku alatan éta, penting pikeun meunteun karentanan spésiés anuran kana cypermethrin.
Polusi lingkungan mangaruhan tumuwuhna normal jeung ngembangkeun amfibi, tapi pangaruh ngarugikeun paling serius nyaéta karuksakan genetik DNA disababkeun ku paparan péstisida13. Analisis morfologi sél getih mangrupa bioindikator penting tina polusi jeung karacunan poténsi zat pikeun spésiés liar29. Uji micronucleus mangrupikeun salah sahiji metodeu anu paling sering dianggo pikeun nangtukeun genotoxicity bahan kimia di lingkungan30. Métode anu gancang, efektif sareng murah anu mangrupikeun indikator anu hadé pikeun polusi kimiawi organisme sapertos amfibi31,32 sareng tiasa masihan inpormasi ngeunaan paparan polutan genotoksik33.
Tujuan tina ulikan ieu nya éta pikeun evaluate poténsi toksik formulasi cypermethrin komérsial pikeun tadpoles akuatik leutik ngagunakeun test micronucleus jeung assessment résiko ékologis.
Kematian kumulatif (%) tina P. gracilis tadpoles kakeunaan konsentrasi béda tina cypermethrin komérsial salila periode akut tina test.
Kematian kumulatif (%) tadpoles P. gracilis kakeunaan konsentrasi anu béda tina cypermethrin komérsial nalika tés kronis.
Kematian anu luhur anu dititénan mangrupikeun akibat tina épék genotoksik dina amfibi anu kakeunaan konsentrasi cypermethrin anu béda (6 sareng 20 μg / L), anu dibuktikeun ku ayana micronuclei (MN) sareng abnormalitas nuklir dina éritrosit. Kabentukna MN nunjukkeun kasalahan dina mitosis sarta pakait sareng beungkeutan goréng kromosom kana microtubulus, defects dina kompléx protéin jawab uptake jeung angkutan kromosom, kasalahan dina segregation kromosom jeung kasalahan dina repairing karuksakan DNA38,39 sarta bisa jadi patali jeung stress oksidatif péstisida-ngainduksi40,41. Abnormalitas séjén dititénan dina sakabéh konsentrasi dievaluasi. Ngaronjatna konsentrasi cypermethrin ngaronjat Abnormalitas nuklir dina éritrosit ku 5% jeung 20% dina dosis panghandapna (1 μg / L) jeung pangluhurna (20 μg / L). Contona, parobahan dina DNA hiji spésiés bisa boga konsekuensi serius pikeun duanana survival jangka pondok tur panjang, hasilna turunna populasi, robah kabugaran réproduktif, inbreeding, leungitna diversity genetik, sarta laju migrasi dirobah. Sadaya faktor ieu tiasa mangaruhan kasalametan sareng perawatan spésiés42,43. Kabentukna abnormalitas érythroid bisa nunjukkeun blok di cytokinesis, hasilna division sél abnormal (éritrosit binucleated)44,45; inti multilobed mangrupakeun tonjolan tina mémbran nuklir jeung sababaraha lobus46, bari Abnormalitas erythroid lianna bisa pakait sareng amplifikasi DNA, kayaning ginjal nuklir / blebs47. Ayana éritrosit anucleated bisa nunjukkeun impaired transportasi oksigén, utamana dina cai kacemar48,49. Apoptosis nunjukkeun maot sél50.
Panaliti sanésna ogé nunjukkeun épék genotoksik tina cypermethrin. Kabaña et al.51 nunjukkeun ayana micronuclei jeung parobahan nuklir kayaning sél binucleated jeung sél apoptosis dina sél Odontophrynus americanus sanggeus paparan konsentrasi luhur cypermethrin (5000 na 10.000 μg L−1) pikeun 96 h. Cypermethrin-ngainduksi apoptosis ieu ogé kauninga dina P. biligonigerus52 na Rhinella arenarum53. Hasil ieu nunjukkeun yén cypermethrin boga épék génotoksik dina sauntuyan organisme akuatik sarta yén MN jeung ENA assay bisa jadi indikator épék sublethal on amfibi sarta bisa jadi lumaku pikeun spésiés asli jeung populasi liar kakeunaan toxicants12.
Formulasi komersil cypermethrin nyababkeun bahaya lingkungan anu luhur (boh akut sareng kronis), kalayan HQ ngaleuwihan tingkat Badan Perlindungan Lingkungan AS (EPA) 54 anu tiasa mangaruhan ngarugikeun spésiés upami aya di lingkungan. Dina penilaian résiko kronis, NOEC pikeun mortalitas nyaéta 3 μg L−1, mastikeun yén konsentrasi anu aya dina cai tiasa nyababkeun résiko pikeun spésiés55. NOEC bisa nepi ka tiwasna pikeun R. arenarum larva kakeunaan campuran endosulfan jeung cypermethrin éta 500 μg L−1 sanggeus 168 h; nilai ieu turun ka 0,0005 μg L−1 sanggeus 336 h. Panulis nunjukkeun yén langkung lami paparan, langkung handap konsentrasi anu ngabahayakeun pikeun spésiés. Éta ogé penting pikeun nyorot yén nilai NOEC langkung luhur tibatan P. gracilis dina waktos paparan anu sami, nunjukkeun yén réspon spésiés kana cypermethrin spésifik spésifik. Saterusna, dina hal mortality, nilai CHQ P. gracilis sanggeus paparan cypermethrin ngahontal 64,67, nu leuwih luhur ti nilai rujukan diatur ku Badan Protection Lingkungan AS54, sarta nilai CHQ larva R. arenarum ogé leuwih luhur ti nilai ieu (CHQ> 388,00 sanggeus 336 h), nu nunjukkeun yén 336 h, nu nunjukkeun resiko tinggi. spésiés. Tempo yén P. gracilis merlukeun kurang leuwih 30 poé pikeun ngarengsekeun métamorfosis56, bisa dicindekkeun yén konsentrasi ditalungtik cypermethrin bisa nyumbang kana turunna populasi ku nyegah individu kainféksi tina asup ka sawawa atawa tahap réproduktif dina umur dini.
Dina taksiran résiko diitung tina micronuclei sareng abnormalitas nuklir éritrosit sanés, nilai CHQ dibasajankeun 14,92 dugi ka 97,00, nunjukkeun yén cypermethrin ngagaduhan résiko genotoksik poténsial pikeun P. gracilis bahkan di habitat alami na. Nyandak mortality akun, konsentrasi maksimum sanyawa xenobiotic tolerable ka P. gracilis éta 4,24 μg L−1. Tapi, konséntrasi sahandapeun 1 μg/L ogé némbongkeun éfék génotoksik. Kanyataan ieu bisa ngakibatkeun kanaékan jumlah individu abnormal57 sarta mangaruhan ngembangkeun sarta baranahan spésiés dina habitat maranéhanana, ngarah kana turunna populasi amfibi.
Formulasi komérsial cypermethrin inséktisida nunjukkeun karacunan akut sareng kronis anu luhur pikeun P. gracilis. Laju mortalitas anu leuwih luhur dititénan, kamungkinan alatan éfék toksik, sakumaha dibuktikeun ku ayana micronuclei jeung abnormalitas inti éritrosit, utamana inti serrated, inti lobed, jeung inti vesicular. Sajaba ti éta, spésiés ditalungtik némbongkeun ngaronjat resiko lingkungan, duanana akut jeung kronis. Data ieu, digabungkeun jeung studi saméméhna ku grup panalungtikan urang, némbongkeun yén malah formulasi komérsial béda tina cypermethrin masih ngabalukarkeun turunna acetylcholinesterase (AChE) jeung butyrylcholinesterase (BChE) kagiatan jeung stress oksidatif58, sarta nyababkeun parobahan aktivitas ngojay na malformations lisan59 di P. gracilis, nunjukkeun yén rumusan komérsial sarta subtoxicity tinggi ieu rumusan cyhallet of cyhallet. Hartmann et al. 60 kapanggih yén formulasi komérsial cypermethrin éta paling toksik mun P. gracilis jeung spésiés séjén tina genus sarua (P. cuvieri) dibandingkeun kalawan salapan péstisida séjén. Ieu nunjukkeun yén konsentrasi cypermethrin anu disatujuan sacara sah pikeun panyalindungan lingkungan tiasa nyababkeun mortalitas anu luhur sareng turunna populasi jangka panjang.
Panalitian salajengna diperyogikeun pikeun ngira-ngira karacunan péstisida ka amfibi, sabab konsentrasi anu aya di lingkungan tiasa nyababkeun mortalitas anu luhur sareng nyababkeun résiko P. gracilis. Panalungtikan ngeunaan spésiés amfibi kudu didorong, sabab data ngeunaan organisme ieu langka, utamana dina spésiés Brasil.
Uji karacunan kronis lumangsung salami 168 jam (7 dinten) dina kaayaan statik sareng konsentrasi sublétal nyaéta: 1, 3, 6 sareng 20 μg ai L−1. Dina duanana percobaan, 10 tadpoles per kelompok perlakuan dievaluasi kalawan genep ulangan, jumlahna aya 60 tadpoles per konsentrasi. Samentara éta, perlakuan cai-hijina dilayanan salaku kontrol négatip. Unggal setelan ékspérimén diwangun ku piring kaca steril kalayan kapasitas 500 ml jeung dénsitas 1 tadpole per 50 ml solusi. Flask ieu ditutupan ku film poliétilén pikeun nyegah évaporasi sarta terus aerated.
Cai dianalisis sacara kimia pikeun nangtukeun konsentrasi péstisida dina 0, 96, sareng 168 jam. Numutkeun Sabin et al. 68 sarta Martins et al. 69, nganalisa dilaksanakeun di Laboratorium Analisis péstisida (LARP) Universitas Federal Santa Maria nganggo kromatografi gas gandeng kana spéktrométri massa quadrupole triple (model Varian 1200, Palo Alto, California, AS). Tekad kuantitatif péstisida dina cai dipidangkeun salaku bahan tambahan (Tabel SM1).
Pikeun uji micronucleus (MNT) sareng uji abnormalitas nuklir sél beureum (RNA), 15 tadpoles ti unggal kelompok perlakuan dianalisis. Tadpoles dibius nganggo lidocaine 5% (50 mg g-170) sareng conto getih dikumpulkeun ku tusukan jantung nganggo jarum suntik heparinisasi. Hapusan darah disusun pada slide mikroskop steril, dikeringkan di udara, difiksasi dengan metanol 100% (4 °C) selama 2 menit, kemudian diwarnai dengan larutan Giemsa 10% selama 15 menit di tempat gelap. Dina ahir prosés, slides dikumbah ku cai sulingan pikeun ngaleungitkeun kaleuwihan noda sareng garing dina suhu kamar.
Sahenteuna 1000 RBCs ti unggal tadpole dianalisis maké mikroskop 100 × kalawan 71 obyektif pikeun nangtukeun ayana Bungbulang na ENA. Jumlahna aya 75,796 RBC tina tadpoles dievaluasi merhatikeun konsentrasi sareng kontrol cypermethrin. Genotoxicity dianalisis nurutkeun métode Carrasco et al. jeung Fenech et al.38,72 ku nangtukeun frékuénsi lesions nuklir handap: (1) sél anucleate: sél tanpa inti; (2) sél apoptosis: fragméntasi nuklir, maot sél diprogram; (3) sél binukléat: sél mibanda dua inti; (4) kuncup inti atawa sél bleb: sél mibanda inti jeung protrusions leutik mémbran nuklir, blebs sarupa ukuranana micronuclei; (5) sél karyolyzed: sél kalawan ukur outline inti tanpa bahan internal; (6) sél notched: sél jeung inti jeung retakan atra atawa notches dina bentuk maranéhanana, disebut oge inti ginjal; (7) sél lobulated: sél mibanda protrusions nuklir leuwih badag batan vesikel disebut tadi; jeung (8) microcells: sél jeung inti condensed jeung sitoplasma ngurangan. Parobahan dibandingkeun sareng hasil kontrol négatip.
Hasil uji karacunan akut (LC50) dianalisis nganggo parangkat lunak GBasic sareng metode TSK-Trimmed Spearman-Karber74. Data uji kronis diuji pra-uji normalitas kasalahan (Shapiro-Wilks) jeung homogénitas varian (Bartlett). Hasilna dianalisis ngagunakeun analisis varian hiji arah (ANOVA). Uji Tukey digunakeun pikeun ngabandingkeun data diantarana, sarta uji Dunnett digunakeun pikeun ngabandingkeun data antara kelompok perlakuan jeung kelompok kontrol négatif.
Data LOEC sareng NOEC dianalisis nganggo uji Dunnett. Tés statistik dilaksanakeun ngagunakeun software Statistica 8.0 (StatSoft) kalayan tingkat signifikansi 95% (p <0.05).
waktos pos: Mar-13-2025