Pamakéan péstisida sintétik anu nyebar nyababkeun seueur masalah, kalebet munculna organisme tahan, degradasi lingkungan sareng ngarugikeun kaséhatan manusa.Ku alatan éta, péstisida mikroba anyar anu aman pikeun kaséhatan manusa sareng lingkungan diperyogikeun.Dina ulikan ieu, biosurfaktan rhamnolipid dihasilkeun ku Enterobacter cloacae SJ2 dipaké pikeun evaluate karacunan reungit (Culex quinquefasciatus) jeung rinyuh (Odontotermes obesus) larva.Hasilna nunjukkeun yén aya laju mortalitas gumantung dosis antara perlakuan.Nilai LC50 (50% konsentrasi bisa nepi ka tiwasna) dina jam 48 pikeun biosurfaktan rinyuh jeung larva reungit ditangtukeun ngagunakeun métode pas kurva régrési nonlinier.Hasilna nunjukkeun yén nilai LC50 48 jam (95% interval kapercayaan) aktivitas larvicidal sareng antitermite biosurfaktan nyaéta 26,49 mg / L (rentang 25,40 dugi ka 27,57) sareng 33,43 mg / L (rentang 31,09 dugi ka 35,68) masing-masing.Numutkeun pamariksaan histopatologis, perlakuan sareng biosurfaktan nyababkeun karusakan parah kana jaringan organél larva sareng rinyuh.Hasil panilitian ieu nunjukkeun yén biosurfaktan mikroba anu diproduksi ku Enterobacter cloacae SJ2 mangrupikeun alat anu saé sareng berpotensi mujarab pikeun kontrol Cx.quinquefasciatus jeung O. obesus.
Nagara-nagara tropis ngalaman sajumlah ageung panyakit bawaan reungit1.Relevansi panyakit bawaan reungit nyebar.Leuwih ti 400.000 jalma maot tina malaria unggal taun, sarta sababaraha kota utama ngalaman epidemics kasakit serius kayaning dengue, muriang konéng, chikungunya jeung Zika.2 Panyakit-ditanggung vektor pakait sareng hiji tina genep inféksi di sakuliah dunya, kalawan reungit ngabalukarkeun paling. kasus signifikan3,4.Culex, Anopheles sareng Aedes mangrupikeun tilu genera reungit anu paling sering dipatalikeun sareng panularan panyakit5.Prévalénsi demam berdarah, inféksi nu ditularkeun ku reungit Aedes aegypti, parantos ningkat dina dasawarsa katukang sareng nyababkeun ancaman kaséhatan masarakat anu signifikan4,7,8.Numutkeun kana Organisasi Kaséhatan Dunia (WHO), langkung ti 40% populasi sadunya aya résiko demam berdarah, kalayan 50-100 juta kasus anyar lumangsung unggal taun di langkung ti 100 nagara9,10,11.Demam berdarah parantos janten masalah kaséhatan masarakat anu utama sabab kajadianna parantos ningkat di sakuliah dunya12,13,14.Anopheles gambiae, umumna katelah reungit Anopheles Afrika, mangrupikeun véktor malaria manusa anu paling penting di daérah tropis sareng subtropis15.Virus West Nile, St. Louis encephalitis, Japanese encephalitis, sareng inféksi virus kuda sareng manuk ditularkeun ku reungit Culex, sering disebut reungit imah biasa.Salaku tambahan, aranjeunna ogé pembawa panyakit baktéri sareng parasit16.Aya leuwih ti 3.000 spésiés rinyuh di dunya, sarta geus aya leuwih ti 150 juta taun17.Seuseueurna hama hirup dina taneuh sareng ngadahar kai sareng produk kai anu ngandung selulosa.Rayap India Odontotermes obesus mangrupa hama penting anu ngabalukarkeun karuksakan parna kana pepelakan penting jeung tangkal perkebunan18.Di daérah tatanén, serangan rinyuh dina sababaraha tahapan tiasa nyababkeun karusakan ékonomi anu ageung pikeun sababaraha pepelakan, spésiés tangkal sareng bahan wangunan.Rayap ogé bisa ngabalukarkeun masalah kaséhatan manusa19.
Masalah résistansi tina mikroorganisme sareng hama dina widang farmasi sareng pertanian ayeuna kompleks20,21.Ku alatan éta, duanana pausahaan kudu néangan antimikrobials-éféktif anyar jeung biopéstisida aman.Péstisida sintétik ayeuna geus sadia tur geus kabuktian bisa tepa sarta ngusir serangga mangpaat non-target22.Dina taun-taun ayeuna, panalungtikan ngeunaan biosurfaktan parantos ngalegaan kusabab aplikasina dina sababaraha industri.Biosurfaktan pohara kapaké sarta vital dina tatanén, rémédiasi taneuh, ékstraksi minyak bumi, baktéri jeung panyabutan serangga, sarta ngolah kadaharan23,24.Biosurfaktan atawa surfaktan mikroba nyaéta bahan kimia biosurfaktan anu dihasilkeun ku mikroorganisme saperti baktéri, ragi jeung fungi di habitat basisir jeung wewengkon nu kacemar minyak25,26.Surfaktan sareng biosurfaktan anu diturunkeun sacara kimia mangrupikeun dua jinis anu dicandak langsung tina lingkungan alam27.Rupa-rupa biosurfaktan dicandak tina habitat laut28,29.Ku alatan éta, para ilmuwan milarian téknologi anyar pikeun ngahasilkeun biosurfaktan dumasar kana baktéri alami30,31.Kamajuan dina panalungtikan sapertos nunjukkeun pentingna sanyawa biologis ieu pikeun panyalindungan lingkungan32.Bacillus, Pseudomonas, Rhodococcus, Alcaligenes, Corynebacterium sareng genera baktéri ieu mangrupikeun perwakilan anu ditaliti23,33.
Aya seueur jinis biosurfaktan kalayan rupa-rupa aplikasi34.Kauntungan anu signifikan tina sanyawa ieu nyaéta sababaraha di antarana gaduh kagiatan antibakteri, larvicidal sareng inséktisida.Ieu ngandung harti yén aranjeunna tiasa dianggo dina industri pertanian, kimia, farmasi sareng kosmetik35,36,37,38.Kusabab biosurfaktan umumna biodegradable sareng mangpaat pikeun lingkungan, aranjeunna dianggo dina program manajemén hama terpadu pikeun nangtayungan pepelakan39.Ku kituna, pangaweruh dasar geus diala ngeunaan aktivitas larvicidal jeung anti rayap biosurfaktan mikroba dihasilkeun Enterobacter cloacae SJ2.Kami nalungtik mortalitas sareng parobahan histologis nalika kakeunaan konsentrasi biosurfaktan rhamnolipid anu béda.Salaku tambahan, urang ngaevaluasi program komputer Quantitative Structure-Activity (QSAR) anu seueur dianggo pikeun Ékologis Struktur-Aktivitas (ECOSAR) pikeun nangtukeun karacunan akut pikeun mikroalga, daphnia, sareng lauk.
Dina ulikan ieu, aktivitas anti rinyuh (karacunan) biosurfaktan dimurnikeun dina rupa-rupa konsentrasi mimitian ti 30 nepi ka 50 mg/ml (dina interval 5 mg/ml) diuji ngalawan rinyuh India, O. obesus jeung spésiés kaopat )Evaluate.Larva instar Cx.Larva nyamuk quinquefasciatus.Konsentrasi biosurfaktan LC50 leuwih 48 jam ngalawan O. obesus jeung Cx.C. solanacearum.Larva nyamuk diidentifikasi menggunakan metode pas kurva regresi nonlinier.Hasilna nunjukkeun yén mortalitas rinyuh ngaronjat kalayan ngaronjatna konsentrasi biosurfaktan.Hasilna nunjukkeun yén biosurfaktan miboga aktivitas larvicidal (Gambar 1) jeung aktivitas anti rinyuh (Gambar 2), kalayan nilai LC50 48 jam (95% CI) 26,49 mg/L (25,40 nepi ka 27,57) jeung 33,43 mg/ l (Gbr. 31.09 ka 35.68), masing-masing (Table 1).Tina segi karacunan akut (48 jam), biosurfaktan digolongkeun salaku "ngabahayakeun" pikeun organisme anu diuji.Biosurfaktan nu dihasilkeun dina ulikan ieu némbongkeun aktivitas larvicidal alus teuing jeung 100% mortality dina 24-48 jam paparan.
Itung nilai LC50 pikeun aktivitas larvicidal.Kurva régrési nonlinier pas (garis padet) jeung interval kapercayaan 95% (wewengkon shaded) pikeun mortality relatif (%).
Itung nilai LC50 pikeun kagiatan anti rinyuh.Kurva régrési nonlinier pas (garis padet) jeung interval kapercayaan 95% (wewengkon shaded) pikeun mortality relatif (%).
Dina ahir percobaan, parobahan morfologis sareng anomali dititénan dina mikroskop.Parobahan morfologis dititénan dina kelompok kontrol jeung perlakuan dina 40x magnification.Ditémbongkeun saperti dina Gambar 3, impairment tumuwuhna lumangsung dina mayoritas larva dirawat kalayan biosurfaktan.Gambar 3a nembongkeun Cx normal.quinquefasciatus, Gambar 3b nembongkeun hiji Cx anomali.Nyababkeun lima larva nematoda.
Pangaruh dosis sublethal (LC50) biosurfaktan dina ngembangkeun larva Culex quinquefasciatus.Gambar mikroskop cahaya (a) tina Cx normal dina 40 × magnification.quinquefasciatus (b) Abnormal Cx.Nyababkeun lima larva nematoda.
Dina ulikan ayeuna, ujian histological larva dirawat (Gbr. 4) jeung rinyuh (Gbr. 5) wangsit sababaraha Abnormalitas, kaasup ngurangan di wewengkon beuteung jeung karuksakan otot, lapisan épitél jeung kulit.midgut.Histologi ngungkabkeun mékanisme kagiatan ngahambat biosurfaktan anu digunakeun dina ulikan ieu.
Histopatologi larva Cx instar 4 normal anu henteu dirawat.jentik quinquefasciatus (kontrol: (a, b)) sareng dirawat kalayan biosurfaktan (perlakuan: (c, d)).Panah nunjukkeun épitél peujit dirawat (epi), inti (n), jeung otot (mu).Bar = 50 µm.
Histopathology of O. obesus untreated normal (kontrol: (a, b)) jeung biosurfaktan dirawat (perlakuan: (c, d)).Panah nunjukkeun épitél peujit (epi) jeung otot (mu), masing-masing.Bar = 50 µm.
Dina ulikan ieu, ECOSAR dipaké pikeun ngaduga karacunan akut produk biosurfaktan rhamnolipid ka produser primér (ganggang héjo), pamakéna primér (kutu cai) jeung konsumén sekundér (lauk).Program ieu ngagunakeun modél sanyawa struktur-aktivitas kuantitatif canggih pikeun meunteun karacunan dumasar kana struktur molekul.Modelna ngagunakeun parangkat lunak struktur-aktivitas (SAR) pikeun ngitung karacunan akut sareng jangka panjang zat kana spésiés akuatik.Sacara husus, Tabél 2 nyimpulkeun perkiraan rata-rata konséntrasi bisa nepi ka tiwasna (LC50) jeung rata-rata konsentrasi éféktif (EC50) pikeun sababaraha spésiés.Toksisitas anu disangka digolongkeun kana opat tingkat ngagunakeun Sistem Klasifikasi sareng Label Bahan Kimia Harmonisasi Global (Tabel 3).
Pengendalian panyakit bawaan vektor, khususna galur reungit sareng reungit Aedes.Urang Mesir, ayeuna susah gawé 40,41,42,43,44,45,46.Sanaos sababaraha péstisida anu aya sacara kimiawi, sapertos pyrethroids sareng organophosphates, rada mangpaat, aranjeunna nyababkeun résiko anu ageung pikeun kaséhatan manusa, kalebet diabetes, gangguan réproduktif, gangguan saraf, kanker, sareng panyakit engapan.Leuwih ti éta, kana waktu, serangga ieu bisa jadi tahan ka aranjeunna13,43,48.Ku kituna, ukuran kontrol biologis éféktif jeung ramah lingkungan bakal jadi métode leuwih populér kontrol reungit49,50.Benelli51 ngusulkeun yén kontrol awal vektor reungit bakal leuwih éféktif di perkotaan, tapi maranéhna teu nyarankeun pamakéan larvicides di padesaan52.Tom et al 53 ogé ngusulkeun yén ngadalikeun reungit dina tahap immature maranéhna bakal jadi strategi aman tur basajan sabab leuwih sénsitip kana kontrol agén 54 .
Produksi biosurfaktan ku galur potent (Enterobacter cloacae SJ2) némbongkeun efficacy konsisten tur ngajangjikeun.Ulikan kami saméméhna ngalaporkeun yén Enterobacter cloacae SJ2 ngaoptimalkeun produksi biosurfaktan nganggo parameter physicochemical26.Numutkeun studi maranéhanana, kaayaan optimal pikeun produksi biosurfaktan ku isolat E. cloacae poténsial nyaéta inkubasi salila 36 jam, agitation dina 150 rpm, pH 7,5, 37 ° C, salinitas 1 ppt, 2% glukosa salaku sumber karbon, 1% ragi. .ekstrak ieu dipaké salaku sumber nitrogén pikeun ménta 2,61 g/L biosurfaktan.Salaku tambahan, biosurfaktan dicirian nganggo TLC, FTIR sareng MALDI-TOF-MS.Ieu dikonfirmasi yén rhamnolipid mangrupakeun biosurfaktan.Biosurfaktan glikolipid mangrupikeun kelas anu paling intensif ditaliti tina jinis biosurfaktan sanés55.Éta diwangun ku bagian karbohidrat sareng lipid, utamina ranté asam lemak.Diantara glikolipid, wawakil utama nyaéta rhamnolipid sareng sophorolipid56.Rhamnolipids ngandung dua gugus rhamnose numbu ka asam mono- atawa di-β-hydroxydecanoic 57 .Pamakéan rhamnolipid dina industri médis sareng farmasi parantos mapan 58, salian ti dianggo panganyarna salaku péstisida 59.
Interaksi biosurfaktan sareng daérah hidrofobik tina siphon pernapasan ngamungkinkeun cai ngalangkungan rohangan stomatalna, ku kituna ningkatkeun kontak larva sareng lingkungan akuatik.Ayana biosurfaktan ogé mangaruhan trakea, anu panjangna caket kana permukaan, anu matak ngagampangkeun larva ngarayap ka permukaan sareng ngambekan.Hasilna, tegangan permukaan cai turun.Kusabab larva teu bisa napel dina beungeut cai, aranjeunna ragrag ka handap tank, disrupting tekanan hidrostatik, hasilna pengeluaran énergi kaleuleuwihan sarta maot ku drowning38,60.Hasil anu sami dicandak ku Ghribi61, dimana biosurfaktan anu diproduksi ku Bacillus subtilis nunjukkeun kagiatan larvicidal ngalawan Ephestia kuehniella.Nya kitu, aktivitas larvicidal of Cx.Das sareng Mukherjee23 ogé ditaksir pangaruh lipopéptida siklik dina larva quinquefasciatus.
Hasil tina ulikan ieu museurkeun kana aktivitas larvicidal biosurfaktan rhamnolipid ngalawan Cx.Maéhan reungit quinquefasciatus konsisten sareng hasil anu diterbitkeun sateuacana.Contona, biosurfaktan dumasar-surfactin dihasilkeun ku rupa-rupa baktéri genus Bacillus dipaké.jeung Pseudomonas spp.Sababaraha laporan awal 64,65,66 ngalaporkeun kagiatan pembunuhan larva tina biosurfaktan lipopeptide ti Bacillus subtilis23.Deepali et al.63 kapanggih yén biosurfaktan rhamnolipid diisolasi tina Stenotropomonas maltophilia miboga aktivitas larvicidal potent dina konsentrasi 10 mg/L.Silva et al.67 ngalaporkeun kagiatan larvicidal biosurfaktan rhamnolipid ngalawan Ae dina konsentrasi 1 g/L.Aedes aegypti.Kanakdande et al.68 ngalaporkeun yén biosurfaktan lipopéptida anu dihasilkeun ku Bacillus subtilis nyababkeun mortalitas umum dina larva Culex sareng rinyuh kalayan fraksi lipofilik Eucalyptus.Nya kitu, Masendra et al.69 dilaporkeun sireum worker (Cryptotermes cynocephalus Light.) mortality of 61,7% dina lipophilic n -hexane na EtOAc fraksi E. ekstrak atah.
Parthipan dkk 70 ngalaporkeun pamakéan inséktisida tina biosurfaktan lipopeptida dihasilkeun ku Bacillus subtilis A1 jeung Pseudomonas stutzeri NA3 ngalawan Anopheles Stephensi, vektor parasit malaria Plasmodium.Aranjeunna niténan yén larva sareng pupa salamet langkung lami, gaduh période oviposisi langkung pondok, steril, sareng umurna langkung pondok nalika dirawat kalayan konsentrasi biosurfaktan anu béda.Nilai LC50 anu dititénan tina B. subtilis biosurfaktan A1 nyaéta 3,58, 4,92, 5,37, 7,10 sareng 7,99 mg/L pikeun kaayaan larva anu béda (nyaéta larva I, II, III, IV sareng pupa panggung).Dina babandingan, biosurfaktan pikeun tahap larva I-IV jeung tahap pupal Pseudomonas stutzeri NA3 masing-masing 2,61, 3,68, 4,48, 5,55 jeung 6,99 mg/L.Fénologi nyangsang larva sareng pupa anu salamet diduga hasil tina gangguan fisiologis sareng métabolik anu signifikan disababkeun ku perlakuan inséktisida71.
Wickerhamomyces anomalus galur CCMA 0358 ngahasilkeun biosurfaktan kalayan 100% aktivitas larvicidal ngalawan reungit Aedes.aegypti 24-jam interval 38 éta leuwih luhur ti dilaporkeun ku Silva et al.Biosurfaktan anu dihasilkeun tina Pseudomonas aeruginosa ngagunakeun minyak kembang matahari salaku sumber karbon geus kabuktian maéhan 100% larva dina waktu 48 jam 67 .Abinaya et al.72 jeung Pradhan et al.73 ogé nunjukkeun pangaruh larvicidal atawa inséktisida surfaktan anu dihasilkeun ku sababaraha isolat tina genus Bacillus.Hiji studi saméméhna diterbitkeun ku Senthil-Nathan et al.kapanggih yén 100% larva reungit anu kakeunaan laguna tutuwuhan téh bisa maot.74.
Nangtukeun pangaruh sublétal inséktisida dina biologi serangga penting pisan pikeun program manajemén hama terpadu sabab dosis/konsentrasi sublétal henteu maéhan serangga tapi tiasa ngirangan populasi serangga dina generasi anu bakal datang ku ngaganggu karakteristik biologis10.Siqueira dkk 75 observasi aktivitas larvicidal lengkep (100% mortality) biosurfaktan rhamnolipid (300 mg / ml) nalika diuji dina rupa konsentrasi mimitian ti 50 nepi ka 300 mg / ml.Tahap larva galur Aedes aegypti.Aranjeunna dianalisis efek waktu maot na konsentrasi sublethal on survival larva sarta aktivitas ngojay.Sajaba ti éta, maranéhna niténan panurunan dina laju ngojay sanggeus 24-48 jam paparan ka konsentrasi sublethal biosurfaktan (misalna 50 mg/mL jeung 100 mg/mL).Racun nu boga peran sublethal ngajangjikeun dianggap leuwih éféktif dina ngabalukarkeun sababaraha karuksakan kana hama kakeunaan76.
Observasi histologis hasil urang nunjukkeun yén biosurfaktan dihasilkeun Enterobacter cloacae SJ2 nyata ngarobah jaringan reungit (Cx. quinquefasciatus) jeung rinyuh (O. obesus) larva.Anomali anu sami disababkeun ku persiapan minyak basil di An.gambiaes.s jeung An.arabica digambarkeun ku Ochola77.Kamaraj et al.78 ogé ngajelaskeun Abnormalitas morfologis anu sami dina An.Larva Stephanie kakeunaan nanopartikel emas.Vasantha-Srinivasan et al.79 ogé ngalaporkeun yén minyak atsiri dompet shepherd ruksak parah dina chamber sareng lapisan épitél Aedes albopictus.Aedes aegypti.Raghavendran dkk ngalaporkeun yén larva reungit dirawat kalayan 500 mg / ml ekstrak miselium tina jamur Penicillium lokal.Ae nunjukkeun karusakan histologis parah.aegypti jeung Cx.Laju maotna 80. Saméméhna, Abinaya et al.Larva instar keempat An diteliti.Stephensi jeung Ae.aegypti kapanggih loba parobahan histologis dina Aedes aegypti dirawat kalayan B. licheniformis exopolysaccharides, kaasup sekum lambung, atrofi otot, karuksakan sarta disorganisasi ganglia cord72.Numutkeun Raghavendran et al., sanggeus perlakuan jeung P. daleae ekstrak mycelial, sél midgut reungit diuji (4th instar larva) némbongkeun bareuh lumen peujit, panurunan dina eusi intercellular, sarta degenerasi nuklir81.Parobahan histologis anu sami dititénan dina larva reungit anu dirawat kalayan ekstrak daun echinacea, nunjukkeun potensi inséktisida tina sanyawa anu dirawat50.
Pamakéan parangkat lunak ECOSAR parantos nampi pangakuan internasional82.Panaliti ayeuna nunjukkeun yén karacunan akut biosurfaktan ECOSAR ka mikroalga (C. vulgaris), lauk sareng kutu cai (D. magna) kalebet dina kategori "toksik" anu ditetepkeun ku PBB83.Modél ékotoksisitas ECOSAR ngagunakeun SAR sareng QSAR pikeun ngaduga karacunan akut sareng jangka panjang zat sareng sering dianggo pikeun ngaduga karacunan polutan organik82,84.
Paraformaldehida, panyangga natrium fosfat (pH 7.4) sareng sadaya bahan kimia anu digunakeun dina ulikan ieu dipésér ti HiMedia Laboratories, India.
Produksi biosurfaktan dilaksanakeun dina labu Erlenmeyer 500 ml anu ngandung 200 mL medium Bushnell Haas steril ditambah ku minyak bumi 1% salaku sumber karbon tunggal.Prekultur Enterobacter cloacae SJ2 (1,4 × 104 CFU/ml) diinokulasi sareng dikultur dina shaker orbital dina suhu 37 ° C, 200 rpm salami 7 dinten.Saatos jaman inkubasi, biosurfaktan ieu sasari ku centrifuging medium budaya dina 3400 × g pikeun 20 mnt dina 4 ° C jeung supernatant dihasilkeun dipaké pikeun tujuan screening.Prosedur optimasi sareng karakterisasi biosurfaktan diadopsi tina ulikan kami saméméhna26.
Larva Culex quinquefasciatus dicandak ti Center for Advanced Study in Marine Biology (CAS), Palanchipetai, Tamil Nadu (India).Larva dipelihara dina wadah plastik anu dieusi cai deionisasi dina suhu 27 ± 2°C sareng fotoperiode 12:12 (cahaya:poék).Larva nyamuk diberi makan larutan glukosa 10%.
Larva Culex quinquefasciatus kapanggih dina bak septic anu kabuka sareng henteu dijagi.Anggo pedoman klasifikasi standar pikeun ngaidentipikasi sareng kultur larva di laboratorium85.Uji larvikidal dilaksanakeun saluyu sareng saran ti Organisasi Kaséhatan Dunia 86.SH.Larva instar kaopat quinquefasciatus dikumpulkeun dina tabung katutup dina kelompok 25 ml sareng 50 ml kalayan celah hawa dua per tilu kapasitasna.Biosurfaktan (0-50 mg/ml) ditambahkeun kana unggal tabung individual tur disimpen dina 25 °C.Pipa kontrol ngan ukur nganggo cai sulingan (50 ml).Larva anu maot dianggap anu henteu nunjukkeun tanda-tanda ngojay salami periode inkubasi (12-48 jam) 87 .Ngitung persentase mortalitas larva ngagunakeun persamaan.(1)88.
Kulawarga Odontotermitidae kaasup rinyuh India Odontotermes obesus, kapanggih dina log ruksak di Kampus Pertanian (Universitas Annamalai, India).Uji biosurfaktan ieu (0–50 mg/ml) nganggo prosedur normal pikeun nangtukeun naha éta ngabahayakeun.Sanggeus garing dina aliran hawa laminar salila 30 mnt, unggal strip kertas Whatman dilapis ku biosurfaktan dina konsentrasi 30, 40, atawa 50 mg/ml.Strip kertas anu dilapis sareng henteu dilapis diuji sareng dibandingkeun di tengah piring Petri.Unggal piring petri ngandung kira-kira tilu puluh rinyuh aktif O. obesus.Kontrol jeung uji rinyuh dibéré kertas baseuh minangka sumber kadaharan.Sadaya piring disimpen dina suhu kamar salami periode inkubasi.Rayap maot saatos 12, 24, 36 sareng 48 jam89,90.Persamaan 1 ieu lajeng dipaké pikeun estimasi persentase mortality rinyuh dina konsentrasi biosurfaktan béda.(2).
Sampel disimpen dina és sareng dipak dina microtubes anu ngandung 100 ml panyangga natrium fosfat 0,1 M (pH 7,4) sareng dikirim ka Laboratorium Patologi Akuakultur Tengah (CAPL) Rajiv Gandhi Center for Aquaculture (RGCA).Laboratorium Histologi, Sirkali, Mayiladuthurai.District, Tamil Nadu, India pikeun analisis salajengna.Sampel langsung dibenerkeun dina paraformaldehida 4% dina suhu 37 ° C salami 48 jam.
Sanggeus fase fiksasi, bahan ieu dikumbah tilu kali kalayan 0,1 M natrium fosfat panyangga (pH 7,4), stepwise dehydrated dina étanol jeung soaked dina résin LEICA salila 7 poé.Zat ieu lajeng disimpen dina kapang plastik dieusian ku résin jeung polimérisasi, lajeng disimpen dina oven dipanaskeun nepi ka 37 ° C nepi ka blok ngandung zat sagemblengna polymerized.
Saatos polimérisasi, blok dipotong nganggo mikrotom LEICA RM2235 (Rankin Biomedical Corporation 10,399 Enterprise Dr. Davisburg, MI 48,350, AS) dugi ka ketebalan 3 mm.Bagian anu dikelompokkeun dina slides, kalawan genep bagian per slide.Slides garing dina suhu kamar, teras diwarnaan ku hematoxylin salami 7 menit sareng dikumbah ku cai anu ngalir salami 4 menit.Sajaba ti éta, nerapkeun solusi eosin ka kulit salila 5 menit sarta bilas ku cai ngocor salila 5 menit.
Toksisitas akut diprediksi ngagunakeun organisme akuatik ti tingkat tropis béda: 96-jam lauk LC50, 48-jam D. magna LC50, sarta 96-jam ganggang héjo EC50.Toksisitas biosurfaktan rhamnolipid kana lauk sareng ganggang héjo ditaksir nganggo parangkat lunak ECOSAR versi 2.2 pikeun Windows anu dikembangkeun ku Badan Perlindungan Lingkungan AS.(Sadia online di https://www.epa.gov/tsca-screening-tools/ecological-struct-activity-relationships-ecosar-predictive-model).
Sadaya tés pikeun kagiatan larvicidal sareng antitermite dilaksanakeun dina rangkep tilu.Regresi nonlinier (log variabel réspon dosis) data mortalitas larva sareng rinyuh dilaksanakeun pikeun ngitung konsentrasi maot median (LC50) kalayan interval kapercayaan 95%, sareng kurva réspon konsentrasi dibangkitkeun nganggo Prism® (versi 8.0, GraphPad Software) Inc. AS) 84, 91.
Panalitian ayeuna ngungkabkeun poténsi biosurfaktan mikroba anu diproduksi ku Enterobacter cloacae SJ2 salaku agén larvicidal sareng antitermite reungit, sareng padamelan ieu bakal nyumbang kana pamahaman anu langkung saé ngeunaan mékanisme tindakan larvicidal sareng antitermite.Studi histologis larva anu dirawat kalayan biosurfaktan nunjukkeun karusakan kana saluran pencernaan, midgut, cortex cerebral sareng hiperplasia sél épitél peujit.Hasil: Evaluasi toksikologis tina aktivitas anti rinyuh sareng larvicidal biosurfaktan rhamnolipid anu dihasilkeun ku Enterobacter cloacae SJ2 ngungkabkeun yén isolat ieu mangrupikeun biopéstisida poténsial pikeun ngontrol panyakit reungit anu dibawa ku vektor (Cx quinquefasciatus) sareng rinyuh (O. obesus).Aya kabutuhan pikeun ngartos karacunan lingkungan anu aya dina biosurfaktan sareng poténsi dampak lingkunganana.Panaliti ieu nyayogikeun dasar ilmiah pikeun meunteun résiko lingkungan biosurfaktan.
waktos pos: Apr-09-2024