Bahan tutuwuhan sareng patogén
Populasi pemetaan asosiasi sorgum anu katelah populasi konversi sorgum (SCP) disayogikeun ku Dr. Pat Brown di Universitas Illinois (ayeuna di UC Davis). Ieu parantos dijelaskeun sateuacanna sareng mangrupikeun kumpulan galur anu rupa-rupa anu dirobih janten teu sénsitip kana fotoperiode sareng jangkung anu langkung alit pikeun ngagampangkeun kamekaran sareng kamekaran pepelakan di lingkungan AS. 510 galur tina populasi ieu dianggo dina panilitian ieu sanaos kusabab pengecambahan anu goréng sareng masalah kontrol kualitas anu sanés, henteu sadaya galur dianggo dina analisis sadaya tilu sipat. Pamustunganana data tina 345 galur dianggo pikeun analisis réspon kitin, 472 galur pikeun réspon flg22, sareng 456 pikeun résistansi TLS.B. cookeiGalur LSLP18 diala ti Dr. Burt Bluhm di Universitas Arkansas.
Pangukuran réspon MAMP
Dua MAMP anu béda dianggo dina panilitian ieu flg22, (katalog Genscript # RP19986), sareng kitin. Tutuwuhan sorgum dipelak dina sisipan anu disimpen dina datar anu dieusi taneuh (33% Sunshine Redi-Earth Pro Growing Mix) di rumah kaca. Tutuwuhan disiram sapoé sateuacan pangumpulan sampel pikeun nyingkahan kalembaban daun anu kaleuleuwihi dina dinten pangumpulan.
Galur-galur éta diacak sareng, kusabab alesan logistik, dipelak dina kelompok 60 galur. Pikeun unggal galur, tilu 'pot' dipelakan dua siki per galur. Kelompok salajengna dipelak pas kelompok saméméhna diolah dugi ka sadaya populasi dipeunteun. Dua uji coba dilaksanakeun pikeun dua MAMP kalayan genotipe anu diacak deui dina masing-masing dua kelompok.
Uji ROS dilaksanakeun sapertos anu parantos dijelaskeun sateuacanna. Sacara singget, pikeun unggal galur, genep siki dipelak dina 3 pot anu béda. Tina bibit anu dihasilkeun, tilu dipilih dumasar kana keseragaman. Bibit anu katingalina teu biasa atanapi langkung jangkung atanapi langkung pondok tibatan kalolobaanana henteu dianggo. Opat cakram daun kalayan diaméter 3 mm dipotong tina bagian panglébarna tina daun ka-4 tina tilu pepelakan sorgum anu umurna 15 dinten anu béda. Hiji cakram per daun tina dua pepelakan sareng dua cakram tina hiji pepelakan, kalayan cakram kadua janten kontrol cai (tingali di handap). Cakram-cakram éta diapungkeun sacara individual dina 50 µl H20 dina pelat hideung 96-sumur, disegel ku segel aluminium pikeun nyingkahan paparan cahaya, sareng disimpen dina suhu kamar sapeuting. Isukna, leyuran réaksi dijieun maké probe chemiluminescent 2 mg/ml L-012 (Wako, katalog # 120-04891), 2 mg/ml horseradish peroxidase (Tipe VI-A, Sigma-Aldrich, katalog # P6782), jeung 100 mg/ml Chitin atawa 2 μM Flg22. 50 µl leyuran réaksi ieu ditambahkeun kana tilu tina opat sumur. Sumur kaopat mangrupa kontrol tiruan, nu ditambahkeun leyuran réaksi nu teu kaasup MAMP. Opat sumur kosong nu ngan ukur ngandung cai ogé diasupkeun kana unggal pelat.
Saatos nambihan larutan réaksi, luminesensi diukur nganggo SynergyTM 2 multi-detection microplate reader (BioTek) unggal 2 menit salami 1 jam. Plate reader ngalakukeun pangukuran luminesensi unggal 2 menit salami 1 jam ieu. Jumlah sadaya 31 bacaan diitung pikeun masihan nilai pikeun unggal sumur. Nilai perkiraan pikeun réspon MAMP pikeun unggal genotip diitung salaku (nilai luminesensi rata-rata tina tilu sumur ékspériméntal—nilai sumur tiruan) -dikurangan nilai sumur kosong rata-rata. Nilai sumur kosong sacara konsisten caket kana nol.
Cakram daun tinaNicotiana benthamiana, hiji galur sorgum responsif luhur (SC0003), sareng hiji galur sorgum responsif handap (PI 6069) ogé kalebet salaku kontrol dina unggal pelat 96-sumur pikeun tujuan kontrol kualitas.
B. cookeipersiapan inokulum sareng inokulasi
B. cookeiInokulum disiapkeun sapertos anu parantos dijelaskeun sateuacanna. Sacara singget, sisikian sorgum direndem dina cai salami tilu dinten, dibilas, disendok kana labu kerucut 1L sareng diautoklaf salami sajam dina 15psi sareng 121 °C. Sikian-sikian éta teras diinokulasi ku sakitar 5 ml miselia anu dimaserasi tina kultur segerB. cookeiIsolat LSLP18 teras diantos salami 2 minggu dina suhu kamar, bari ngocok botol unggal 3 dinten. Saatos 2 minggu, sisikian sorgum anu kaserang jamur dikeringkeun di udara teras disimpen dina suhu 4 °C dugi ka inokulasi lapangan. Inokulum anu sami dianggo pikeun sakumna uji coba sareng didamel seger unggal taun. Pikeun inokulasi, 6–10 sisikian anu kaserang jamur disimpen kana pepelakan sorgum anu umurna 4–5 minggu. Spora anu dihasilkeun tina jamur ieu ngamimitian inféksi dina pepelakan sorgum ngora dina saminggu.
Persiapan siki
Sateuacan dipelak di lapangan, siki sorgum dirawat ku fungisida, inséktisida, sareng campuran safener anu ngandung ~ 1% fungisida Spirato 480 FS, 4% fungisida Sebring 480 FS, 3% safener siki Sorpro 940 ES. Teras siki dikeringkeun di udara salami 3 dinten anu masihan lapisan ipis campuran ieu di sakitar siki. Safener ngamungkinkeun panggunaan herbisida Dual Magnum salaku perlakuan pra-tumuwuhna.
Evaluasi résistansi Bintik Daun Sasaran
SCP dipelak di Stasion Panalungtikan Tanaman Pusat di Clayton, NC dina tanggal 14–15 Juni 2017 sareng 20 Juni 2018 dina desain blok lengkep acak kalayan dua ulangan ékspérimén dina unggal kasus. Ékspérimén dipelak dina jajar tunggal 1,8 m kalayan lébar jajar 0,9 m nganggo 10 siki per plot. Dua jajar wates dipelak di sabudeureun periferal unggal ékspérimén pikeun nyegah épék sisi. Ékspérimén diinokulasi dina tanggal 20 Juli 2017 sareng 20 Juli 2018 dina titik éta pepelakan sorgum aya dina tahap kamekaran 3. Rating dicandak dina skala hiji dugi ka salapan, dimana pepelakan anu henteu nunjukkeun tanda-tanda panyakit dinilai salaku salapan sareng pepelakan anu paéh sapinuhna dinilai salaku hiji. Dua rating dicandak dina taun 2017 sareng opat bacaan dina taun 2018 dimimitian dua minggu saatos inokulasi unggal taun. sAUDPC (standarisasi daérah dina kurva kamajuan panyakit) diitung sapertos anu dijelaskeun sateuacanna.
Waktos posting: Apr-01-2021