Bahan tutuwuhan sareng patogén
Populasi pemetaan asosiasi sorgum anu katelah populasi konversi sorgum (SCP) disayogikeun ku Dr. Pat Brown di Universitas Illinois (ayeuna di UC Davis).Eta geus ditétélakeun saméméhna tur mangrupakeun kumpulan garis rupa-rupa dirobah jadi photoperiod-insensitivity sarta stature leutik pikeun mempermudah tumuwuhna tumuwuhna tutuwuhan di lingkungan AS.510 garis tina populasi ieu dipaké dina ulikan ieu sanajan alatan pengecambahan goréng jeung masalah kontrol kualitas lianna, teu sakabeh garis dipaké dina analisis sakabéh tilu Tret.Pamustunganana data tina 345 garis digunakeun pikeun analisis réspon kitin, 472 garis pikeun réspon flg22, sareng 456 pikeun résistansi TLS.B. masakgalur LSLP18 dicandak ti Dr Burt Bluhm di Universitas Arkansas.
Pangukuran respon MAMP
Dua MAMP béda dipaké dina ulikan ieu flg22, (Genscript katalog # RP19986), sarta kitin.Tutuwuhan sorgum dipelak dina sisipan anu disimpen dina rumah susun anu dieusi taneuh (33% Sunshine Redi-Earth Pro Growing Mix) di rumah kaca.Tutuwuhan disiram sadinten sateuacan ngumpulkeun sampel pikeun nyegah kalembaban daun tambahan dina dinten ngumpulkeun.
Garis-garisna sacara acak sareng, pikeun alesan logistik, ditanam dina bets 60 garis.Pikeun unggal baris, tilu 'pot' dipelakan dua siki per baris.bets saterusna dipelak pas bets saméméhna geus diolah nepi ka sakabéh populasi geus ditaksir.Dua percobaan ékspérimén dilaksanakeun pikeun duanana MAMP kalayan genotypes ulang acak dina unggal dua ngalir.
Assays ROS dilaksanakeun sakumaha anu dijelaskeun sateuacana.Sakeudeung, pikeun tiap baris, genep siki dipelak dina 3 pot béda.Tina bibit anu dihasilkeun, tilu dipilih dumasar kana keseragaman.Bibit anu katingalina teu biasa atanapi langkung jangkung atanapi langkung pondok tibatan seuseueurna henteu dianggo.Opat cakram daun kalayan diaméter 3 mm dipotong tina bagian lega tina daun ka-4 tina tilu pepelakan sorgum umur 15 dinten anu béda.Hiji cakram per daun tina dua pepelakan sareng dua cakram tina hiji pepelakan, sareng cakram kadua janten pangendali cai (tingali di handap).Cakram éta individual diapungkeun dina 50 µl H20 dina piring 96-sumur hideung, disegel ku segel aluminium pikeun ngahindarkeun paparan cahya, sarta diteundeun dina suhu kamar sapeuting.Isukna leyuran réaksi dijieun maké 2 mg / ml chemiluminescent usik L-012 (Wako, katalog # 120-04891), 2 mg / ml horseradish peroksidase (Tipe VI-A, Sigma-Aldrich, katalog # P6782), jeung 100 mg/ml Kitin atanapi 2 μM Flg22.50 µl larutan réaksi ieu ditambahkeun kana tilu tina opat sumur.Sumur kaopat mangrupikeun kontrol bohongan, dimana solusi réaksi henteu kalebet MAMP ditambah.Opat sumur kosong anu ngan ukur ngandung cai ogé kalebet dina unggal piring.
Saatos nambahkeun solusi réaksi, luminescence diukur maké SynergyTM 2 multi-deteksi microplate maca (BioTek) unggal 2 mnt salila 1 jam.Pamaca piring nyandak pangukuran luminescence unggal 2 mnt salami 1 jam ieu.Jumlah sadaya 31 bacaan diitung pikeun masihan nilai pikeun unggal sumur.Nilai perkiraan pikeun réspon MAMP pikeun tiap genotype diitung salaku (nilai luminescence rata-rata tina tilu sumur ékspérimén-nilai sumur bohongan) -minus rata-rata nilai sumur kosong.Nilai sumur kosong sacara konsisten ngadeukeutan nol.
Cakram daun tinaNicotiana benthamiana, Hiji garis sorgum responsif tinggi (SC0003), sarta hiji garis sorgum responsif low (PI 6069) ieu ogé kaasup salaku kadali dina unggal plat 96-sumur pikeun tujuan kadali kualitas.
B. masakpersiapan inokulum sareng inokulasi
B. masakInokulum disiapkeun sakumaha anu dijelaskeun sateuacana.Sakeudeung, sorghum séréal direndam dina cai salila tilu poé, dikumbah, scooped kana 1L flasks conical jeung autoclaved salila sajam dina 15psi jeung 121 °C.Biji-bijian teras diinokulasi sareng kira-kira 5 ml mycelia macerated tina budaya segerB. masakLSLP18 ngasingkeun sarta ninggalkeun salila 2 minggu dina suhu kamar, oyag flasks unggal 3 poé.Saatos 2 minggu, biji sorgum anu kaserang jamur digaringkeun di udara teras disimpen dina suhu 4 ° C dugi ka inokulasi di lapangan.Inokulum anu sarua dipaké pikeun sakabéh sidang sarta dijieun seger unggal taun.Pikeun inokulasi, 6-10 séréal infested disimpen kana whorl tutuwuhan sorgum umur 4-5 minggu.Spora anu dihasilkeun tina fungi ieu ngamimitian inféksi dina pepelakan sorgum ngora dina saminggu.
Persiapan siki
Saméméh penanaman di sawah, siki sorgum dirawat kalayan fungisida, inséktisida, jeung campuran safener nu ngandung ~ 1% Spirato 480 FS fungisida, 4% Sebring 480 FS fungisida, 3% Sorpro 940 ES siki safener.Teras siki digaringkeun ku hawa salami 3 dinten anu nyayogikeun lapisan ipis campuran ieu di sabudeureun siki.The safener diwenangkeun pamakéan herbisida Dual Magnum salaku perlakuan pre-munculna.
Evaluasi Target Daun Spot lalawanan
The SCP ieu dipelak di Stasion Panalungtikan Central Tanaman di Clayton, NC on June 14-15 2017 jeung Juni 20, 2018 dina rarancang blok lengkep randomized kalawan dua réplikasi eksperimen dina unggal hal.Percobaan dipelak dina baris tunggal 1,8 m kalayan rubak baris 0,9 m ngagunakeun 10 siki per plot.Dua jajar wates anu dipelak di sabudeureun periphery unggal percobaan pikeun nyegah épék tepi.Percobaan diinokulasikeun dina 20 Juli 2017 sareng 20 Juli 2018 dimana titik pepelakan sorgum aya dina tahap pertumbuhan 3. Peunteun dicandak dina skala hiji dugi ka salapan, dimana pepelakan anu henteu aya tanda-tanda panyakit di skor salapan sareng lengkep. tutuwuhan maot dicitak salaku hiji.Dua rating dicandak dina 2017 sareng opat bacaan dina 2018 dimimitian dua minggu saatos inokulasi unggal taun.sAUDPC (wilayah standar dina kurva kamajuan panyakit) diitung sakumaha anu dijelaskeun sateuacana.
waktos pos: Apr-01-2021